Aankoop, levering en installatie van een geautomatiseerd celcultuur platform

Onderwerp van de opdracht: Levering en inbedrijfstelling van een geïntegreerd en volledig geautomatiseerd celkweekplatform met de mogelijkheid om verschillende mediaformuleringen te bereiden. Achtergrond en doelstelling: VIB is van plan een geautomatiseerd robotplatform aan te schaffen en in gebruik te nemen voor de uitvoering van verschillende protocollen van een week met betrekking tot de differentiatie van menselijke pluripotente stamcellen (hPSC's) in meerdere celtypen. Het platform zal worden gebruikt om grote cohorten (tot 50) onafhankelijke hPSC-lijnen te differentiëren en deze tegelijkertijd te differentiëren in ten minste 3 verschillende neuronale (of gliale) celtypen. Daarom moet het de huidige handmatige procedures die in ons laboratorium worden gebruikt, automatiseren, met als doel de reproduceerbaarheid te verbeteren en de technische variabiliteit voor eindgebruikers te minimaliseren, evenals het verminderen van verbruiksartikelen en FTE-vereisten. Bovendien zal het geautomatiseerde robotplatform reagentia voorbereiden voor verschillende celkweektoepassingen, zoals experimenten met grote nucleïnezuurtransfectie, bereiding van DNA-mengsels voor de productie van recombinante lentivirale of adenovirale vectoren, enz De belangrijkste procedures die moeten worden geautomatiseerd, worden hieronder beschreven: • Startmonster: meerdere hPSC-lijnen in putje van 6-, 12- of 24-putjes platen met barcode, klaar om een differentiatieprotocol te starten in een incubator met een sorteermechanisme. • Bereiding van celkweekmedia: iPSC-differentiatieprotocollen vereisen vaak dagelijkse voeding met evoluerende mediaformuleringen (tot 6 verschillende formuleringen over een periode van 30 dagen). De verschillende mediaformuleringen vereisen aanvulling van basale media (door de gebruiker verstrekt, in de schaal van enkele milliliters tot op een literschaal) met kleine moleculen of recombinante eiwitten (op microliterschaal). Kleine moleculen en recombinante eiwitten moeten worden gekoeld terwijl ze aanwezig zijn in het geautomatiseerde celkweekapparaat. • Celdifferentiatieregime: inclusief dagelijkse bereiding van specifieke media door gekoelde dosering van kleine moleculen of recombinante eiwitten op basale media (tot 6 verschillende formuleringen gedurende een periode van 30 dagen), dagelijkse mediavervanging en verschillende celpassages. • Preparaat van nucleïnezuurvectoren: bereiding van combinatorische recombinante DNA-plasmidemengsels voor grote transfectie-experimenten voor screeningdoeleinden. • Workflows voor immunofluorescentiekleuring: hoewel het strikt genomen geen celkweekprocedure is, vereisen celafleidingsprotocollen uitgebreide kwaliteitscontrole met behulp van immunofluorescentiekleuring en andere technieken. Het beoogde geautomatiseerde celkweekplatform zal naar verwachting gebruiksvriendelijk zijn (minimale of geen programmeerervaring vereist) en naadloos werken binnen 1 maand na installatie. De voorkeur zal worden gegeven aan platforms die compatibel zijn met open of algemeen beschikbare verbruiksgoederen in plaats van propriëtaire platforms.