Kauf und Wartung eines Durchflusszytometers "MACSQuant Analyzer 16"

I. Kurzbeschreibung des Forschungsfeldes Ziel des Forschungsvorhabens sind zelluläre und molekulare Untersuchungen zur Rolle extrazellulärer Vesikel (EVs) für die Kommunikation von Hautzellen im Kontext der Wundheilung (s. Arbeitsprogramm der Projektbeschreibung). Von zentraler Bedeutung hierfür ist die Isolierung und nachfolgende Analyse von EVs aus den Kulturüberständen stimulierter, primärer Keratinozyten und humaner mesenchymaler Stammzellen mithilfe des MACSQuant Analyzers. EVs stellen wegen ihrer geringen Größe, ihres speziellen Aufbaus und der Notwendigkeit einer zuverlässigen Erkennung als Voraussetzung für eine effiziente Anreicherung besonders hohe Anforderungen an das Durchflusszytometer. II. Bedarf Der Durchflusszytometer muss zwingend folgende Anforderungen kumulativ erfüllen: - Zuverlässigen Erfassung besonders kleiner EVs (z.B. Exosomen), sowie sämtlicher Unterformen von EVs - Schonende Isolierung, Anreicherung und sofortige Analyse von EV´s aus Kulturüberständen, um darin enthaltene microRNAs untersuchen zu können. - Anreicherung von Zellen und ihrer Subpopulationen aus Mischkulturen, um diese einer differentiellen Analyse unterziehen zu können. - Untersuchungen zur Übertragbarkeit der Resultate aus THP-1-Monozyten-Monokulturen auf primäre, humane Zellen aus Vollblut (PBMC). III. Technische Eigenschaften des Miltenyi MAC SQuant Analyzer 16 Durchflusszytometers Miltenyi Biotec ist Hersteller und einziger Anbieter des MACSQuant Analyzer 16 und MACS MiniSampler Plus. Die Geräte sind nicht bei anderen Anbietern erhältlich. 1. Der MACSQuant Analyzer 16 verbindet eine benutzerfreundliche Automatisierung mit leistungsstarker, durchflusszytometrischer Analyse. Die geringe Stellfläche (67×50 cm) ermöglicht einen Betrieb des Gerätes auf einem normalen Labortisch. Es verfügt über drei Laser (405 nm, 488 nm, 640 nm) für eine stabile und konsistente Lichtdetektion. Darüber erlaubt das Gerät die vollautomatische Verarbeitung von Zellproben, einschließlich Probenmarkierung, Probenmischung, Probeninkubation, Probenverdünnung und magnetischer Voranreicherung. Im Express Modes läuft die Datenerfassung und -analyse vollautomatisch. 2. Der motorisierte MACS MiniSampler Plus gewährleistet durch den Einsatz von vorkühlbaren Probenhaltern (MACS Chill Racks) die Probenqualität und -integrität während der Messung. Als Erweiterung des MACSQuant Analyzer 16 erlaubt der MACS MiniSampler Plus die flexible Verarbeitung mehrere Proben aus 12×75 mm Röhrchen oder aus 96-Well-Plattenformaten (U-, V-, Flat-Bottom- oder Deep-Well-Platten). 3. Vollautomatische Wartungsverfahren wie PMT-Kalibrierung und Geräteabschaltung sind Teil der Standardausstattung des Instruments. Die Verwendung der MACSQuantifyTM Software ermöglicht die voll automatische Aufnahme und Verarbeitung mehrerer Proben, wodurch auch im Hochdurchsatz unter konstanten Bedingungen gearbeitet werden kann. 4. Der MACSQuant 16 verfügt über 14 Fluoreszenz- und zwei Streulichtkanäle und erlaubt damit eine große Flexibilität bei der Zusammenstellung von Markern für die Zellanalyse. Der Seitwärtsstreulichtkanal (Side Scatter) wird von der 405 nm-Lichtquelle abgeleitet, weil die geringe Wellenlänge die Sensitivität für die Messung kleiner Partikel, im Vergleich zur herkömmlich verwendeten 488 nm-Lichtquellen, erhöht. Die Angabe kann jederzeit als absolute Zellzahl in Zellen/?l oder Zellen/ml erfolgen. 5. Die MACSQuantify Software kann alle üblichen durchflusszytometrischen Datenanalysen und -visua lisierungen, einschließlich Histogrammen, Punktdiagrammen, Dichtediagrammen, Gatings, Überlagerungen und statistische Ansichten durchführen. Die Datenanalyse kann auch in Bezug auf Fläche, Höhe und Breite erfolgen. Die Messdaten werden in speziellen Verzeichnissen mit Back-Up-Funktion abgelegt. 6. Der MACSQuant Analyzer 16 verwendet Smart Gain-Technologie zur Kalibrierung und Qualitätskon trolle. Dieser Prozess ermöglicht die gemeinsame Nutzung von Einstellungen zwischen mehreren MACSQuantAnalyzern. Die Geräteeinstellungen werden automatisch angepasst, wodurch an unterschiedlichen Geräten mit gleichen Grundeinstellungen gearbeitet werden kann. 7. Der MACSQuant Analyzer 16 kann eine Voranreicherung von magnetisch markierten Zellen vor der durchflusszytometrischen Analyse durchführen. Dieses Feature basiert auf der bekannten MACS-Technologie unter Verwendung der MACSQuant-Säule in Kombination mit der MACS Cell Enrichment Unit. Diese Funktion ist besonders nützlich für die Analyse selten vorkommender Zellen, wie z.B. antigenspezifischer T-Zellen oder Stammzellen, die mit MACS MicroBeads markiert werden können. Eine einfache Bedienung des MACSQuant Analyzer 16 wird durch einen farbigen Touchscreen mit intuitiver Menüführung gewährleistet. Der Nutzer hat die Möglichkeit, vorprogrammierte Datenerhebungen oder Analysen mit Hilfe von MACSQuant Express Modes durchzuführen oder vorgefertigte Probenanalyseprotokolle individuell anzupassen. Alle benutzerdefinierten Programme können für eine spätere, erneute Nutzung gespeichert werden. Die Datenanalyse kann direkt am Gerät oder an einem externen Computer erfolgen. Die MACSQuantify Software bietet hierfür eine Vielzahl von Funktionen und Anzeigeoptionen. 9. Der MACSQuant Analyzer 16 kann mit Liquid Handling- und Probenverwaltungsplattformen von Drittanbietern kombiniert werden, was das Einsatzspektrum enorm erweitern kann. Assay-Anpassungen und Integrationsoptionen können auf Anfrage bereitgestellt und in der Regel auch nachträglich noch realisiert werden. 10. Online-Anbindung des Kunden mit Live-Support direkt am Gerät. Es stehen individuelle Servicever träge zur Verfügung, einschließlich Optionen für vorbeugende Wartungen bis hin zu Full-Service Verträgen.